高考生物实验知识点总结：叶绿体色素的提取和分离

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　　一实验原理与方法

　　1．色素的提取原理：叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中。提取方法：用丙酮、乙醇等能提取色素。

　　2．色素分离的原理：层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。分离方法：纸层析法。用毛细吸管在滤纸条的下端沿铅笔线划一条滤液细线，待滤液干后再划一两次，然后将滤纸条插入层析液中（滤液细线不能接触层析液）。分离结果：滤纸条上从上到下出现四条色素带：橙黄色（较窄，胡萝卜素）、黄色（叶黄素）、蓝绿色（较宽，叶绿素a）、黄绿色（叶绿素b）。胡萝卜素与叶黄素之间距离较大，叶绿素a与叶绿素b之间距离较小。

　　二实验注意事项

　　1.加SiO2为了研磨得更充分。

　　2.加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。因为叶绿素含镁，可被细胞液中的有机酸产生的氢代替，形成去镁叶绿素，CaCO3可中和液泡破坏释放的有机酸，防止叶绿体被破坏。

　　3.加无水乙醇是因为叶绿体色素易溶于无水乙醇等有机溶剂。

　　三实验讨论：1．滤纸条上的滤液细线，为什么不能触及层析液？

　　答：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。

　　2．提取和分离叶绿体色素的关键是什么？

　　答：提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿；②研磨要迅速、充分；③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。

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